این مطالعه به منظور بررسی اثر غلظت‌های مختلف تنظیم کننده های رشد گیاهی بر کالوس¬زایی ریز نمونه برگ گیاه مهم دارویی بذرالبنج (Hyoscyamus niger L.) در قالب طرح کاملا تصادفی با 4 تیمار در 4 تکرار اجرا شد. ریز نمونه برگی از بذور کشت شده در محیط کشت MS که به مرحله شش برگی رسیده بودند تهیه شدند. محیط کشت موراشیگ و اسکوگ حاوی نفتالین استیک اسید (NAA) و بنزل آدنین (BA)، تیمار1 (A) و تیمار دوم (B) حاوی نفتالین استیک اسید(NAA) و کینیتین(Kin)، تیمار سوم (C) حاوی توفوردی (2,4-D) و بنزیل آدنین(BA) و تیمار چهارم (D) حاوی توفوردی(2,4-D) و کینیتین(Kin) هر کدام بمقدار3 میلی گرم بر لیتر به صورت جداگانه و به منظور ایجادکالوس در ریز نمونه های برگی استفاده شد. پس از گذشت سه هفته تغییرات بررسی شد. در تمامی تیمارها (A,B,C,D) تولید کالوس مشاهده گردید. اما این مقدار در تیمارهای حاوی توفوردی(C , D) با تاخیر و به سختی رخ داد که به دلیل وارد شدن ریز نمونه به فاز گسترش و غول پیکری بود و نتیجه اینکه در تیمارهای حاوی توفوردی قطعات ریز نمونه باید کوچکتر و دارای برش های بیشتر باشد تا زخم های ایجاد شده سبب ورود سریعتر ریزنمونه به فاز کالزایی شود و مانع گسترش بیش از حد برگ جهت رشد گردد.